Desgemificação Embrionária

O peixe-zebra é um vertebrado crucial para os estudos embrionários, devido à sua habilidade em gerar uma grande quantidade de embriões transparentes que se desenvolvem rapidamente. A transparência desses embriões facilita a utilização de várias técnicas de estudo. No entanto, o desenvolvimento embrionário inclui a formação de múltiplas camadas de tecido, apresentando desafios na visualização de estruturas profundas devido à limitada passagem de luz, especialmente entre a gema.

O objetivo deste estudo é desenvolver um método acessível para remover a gema, permitindo a obtenção de imagens de alta qualidade de tecidos escurecidos. Para isso, é crucial realizar a remoção dos córions (o anexo embrionário mais externo) de maneira extremamente cuidadosa e específica para cada estágio de desenvolvimento dos embriões. Os embriões são transferidos para tubos de microcentrífuga de 2 mL, com um limite de 20 embriões por tubo. Após a remoção da maior parte da água do ovo, os embriões são fixados com paraformaldeído (PFA) a 1%. Em seguida, são lavados para iniciar o processo de remoção das gemas, utilizando dois pares de pinças. Por fim, os embriões são refixados em PFA a 4% para garantir uma fixação adequada dos tecidos e, após nova lavagem, estão prontos para procedimentos de imunocoloração ou aplicação de imagens, podendo ser direcionados a tecidos ou órgãos específicos. Este método inovador superou as limitações de abordagens convencionais e foi crucial para a descoberta de alterações morfogenéticas na endoderme durante o desenvolvimento embrionário do peixe-zebra.

Referencia: Joseph Frommelt, Emily Liu, Afraz Bhaidani, Bo Hu, Yuanyuan Gao, Ding Ye, Fang Lin; Flat mount preparation for whole-mount fluorescent imaging of zebrafish embryos.. doi: https://doi.org/10.1242/bio.060048  

Texto e imagem elaborados pelas discentes de Farmácia da UERJ ZO, Luiza Maria Ventura da Silva e Lavínia Muniz de Lima.

Revisão textual por: Samiris Fernandes.

Publicado por: Diego Aguiar.